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通报表扬单位的范文(实用10篇)

通报表扬单位的范文 第1篇

【关键词】 脂肪细胞 蒲黄总黄酮 游离脂肪酸 PPAR家族

Objective: To explore the effects of Pollen Typhae total flavones (PTF) on the mRNA expressions of peroxisome proliferatoractivated receptors (PPARs) α, γ, β/δ so as to analyze its possible mechanism in improving the insulin sensitivity of 3T3L1 adipocytes.

Methods: Adipocytes were treated with PTF, and expressions of PPARα、PPARγ、PPARβ/δ mRNAs relating to the adipocyte glucose and lipid metabolism were determined by reverse transcription polymerase chain reaction.

Results: PTF obviously upregulated the expressions of PPARα and PPARγ mRNAs, all showing significant differences as compared with those in the normal control group (P

Conclusion: With its function as an insulin sensitizer, PTF may enhance the PPARα and PPARγ mRNA expressions in 3T3L1 adipocytes.

Keywords: 3T3L1 adipocyte; Pollen Typhae total flavones; free fatty acid; peroxisome proliferatoractivated receptors

游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)的溢出是早期胰岛素抵抗及其靶器官代谢异常的中心环节之一,也是近年来代谢领域研究的重点[1]。脂肪组织是机体能量调节器官,其脂肪代谢及糖代谢的异常在早期胰岛素抵抗发生发展中起着极其重要的作用。蒲黄是调节血脂的常用中药,对胰岛素抵抗亦有改善作用[2]。在临床上广泛应用于糖脂代谢异常的患者。本研究所在前期的细胞学实验中也发现蒲黄的有效成分蒲黄总黄酮(Pollen Typhae total flavones, PTF)可改善成熟脂肪细胞的葡萄糖消耗和游离脂肪酸的溢出[3]。本次研究通过观察蒲黄总黄酮对3T3L1脂肪细胞过氧化物酶体增生物激活受体(peroxisome proliferatoractivated receptor, PPAR)家族基因表达的影响,进一步探讨蒲黄总黄酮改善胰岛素抵抗的机制。

1 材料与方法

药物和试剂 罗格列酮(rosiglitazone,ROS)由浙江天马制药有限公司提供;蒲黄总黄酮由上海信谊药业有限公司提供;达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium, DMEM)和TRIzol由GIBCO公司提供;地塞米松、异丁基甲基黄嘌呤和胰岛素购自Sigma公司;油红O购自Sigma公司;牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)为SinoAmerican Biotech公司产品;逆转录酶AMV第一链cDNA合成试剂盒为BioBasic公司产品;聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增试剂盒购自Invitrogen公司。

细胞培养及分组 3T3L1细胞株购自America Type Culture Collection公司,其培养与诱导分化方法同文献[4]。将3T3L1前脂肪细胞接种于培养板,用含10%小牛血清的高糖DMEM培养,待细胞融合2 d后,加含 mmol/L异丁基甲基黄嘌呤、 nmol/L地塞米松和10 μg/ml胰岛素的10%胎牛血清高糖DMEM培养48 h,换以含10 μg/ml胰岛素的含10%胎牛血清培养液再培养48 h,随后以10%胎牛血清高糖DMEM继续培养,2 d换培养液1次,诱导分化8~12 d,3T3L1细胞90%呈脂肪细胞表型[1]。将24孔培养板中分化成熟的脂肪细胞以含 BSA的DMEM培养基培养12 h后,分为空白对照组(不加药)、蒲黄总黄酮组( g/L)和罗格列酮组(5 μmol/L),药物均使用去离子水配置,药物干预培养24 h。

PPAR mRNA表达 采用实时定量PCR法检测。药物处理同上,抽提细胞总RNA,以AMV第一链cDNA合成试剂盒逆转录为cDNA。上下游引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。PPARγ上游引物:5'TTT CAA GGG TGC CAG TTT CG3';下游引物:5'GGG AGG CCA GCA TCG TGT A3'。PPARα上游引物:5'TAC GGC AAT GGC TTT ATC AC3';下游引物:5'CCC TCC TGC AAC TTC TCA AT3'。PPARβ/δ上游引物:5'TGC GGC AAC GTG AAA GGA AT3';下游引物:5'ACG CGG TAT CCA CGT CAA GTA3'。看家基因甘油醛3磷酸脱氢酶(glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase, GAPDH)上游引物:5'AAG GTC GGA GTC AAC GGA TT3';下游引物:5'CTG GAA GAT GGT GAT GGG ATT3'。参照试剂盒说明书,反应体系为25 μl,内含5×PCR Buffer μl,Mg2+ μl,dNTP μl,引物 μl,25×SYBR GreenⅠ μl,校准液 μl,ExTaq酶 μl,ddH2O μl,模板 μl。实时定量PCR反应在Cotbett RotoGene 3000实时定量PCR仪中进行。反应程序为:95 ℃预变性10 s,60 ℃ (GAPDH)退火30 s,55 ℃延伸10 s,共80个循环,每个循环结束后采集荧光信号。最后绘溶解曲线以确定反应产物无引物二聚体及非特异性扩增。当荧光信号强度超过基线时,其域值循环数(cycle threshold,Ct)被记录下来。在实时定量PCR中,Ct值被认为与被扩增基因的初始浓度密切相关。扩增后根据Ct值及标准曲线计算出目的基因拷贝数与106 GAPDH的相对值。

统计学方法 采用SPSS for Windows统计软件对实验结果进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析,计量资料数据用x±s表示。

2 结 果

蒲黄总黄酮组3T3L1细胞PPARα、PPARγ mRNA表达量均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P

3 讨 论

脂肪代谢的改变及其对糖代谢异常的影响在早期胰岛素抵抗的中心作用一直是国内外研究的热点。研究药物对脂肪细胞糖脂代谢的影响,对于防治与胰岛素抵抗密切相关的2型糖尿病、血脂异常、脂肪肝和动脉粥样硬化等代谢性疾病的发病及减轻其危害具有重要意义。近年来FFA在胰岛素抵抗的发生发展中的核心作用正成为倍受关注的研究热点。前期研究已经证实,蒲黄总黄酮可直接抑制成熟3T3L1脂肪细胞FFA的外溢,同时可改善脂肪细胞对葡萄糖的摄取和利用,提示蒲黄总黄酮可改善脂肪及葡萄糖代谢,由此对胰岛素抵抗特别是早期胰岛素抵抗有一定的改善作用[3]。

PPARs属激素核受体超家族成员,由PPARα、PPARγ、PPARβ/δ 3个亚型组成。其中,PPARα在脂质代谢中起着关键的调节作用[5]。PPARα活化可以调节与脂肪酸氧化有关的基因的转录,参与脂质代谢、能量动态平衡和胰岛素敏感性等生物学过程的调节等。PPARγ最具脂肪组织特异性,对脂肪细胞的分化起着重要作用[6],并在一定程度上抑制脂肪组织分泌TNFα等脂肪细胞因子,有利于改善胰岛素抵抗[7]。PPARβ/δ近年才受到广泛关注,也被发现与脂肪生成和脂质代谢调节有密切关系[8]。大量研究表明,PPARs的调节剂有望成为2型糖尿病、肥胖、高脂血症和动脉粥样硬化等疾病的治疗药物。PPARα的激动剂贝丁酸和PPARγ的激动剂噻唑烷二酮类(thiazolidinediones, TZD)药物,已被临床成功用作降脂药和胰岛素增敏剂。PPARβ/δ的激动剂可能会通过对骨骼肌的作用而成为另一个新型胰岛素增敏及降脂药物。因为3种PPAR亚型在代谢综合征的发病中作用不完全相同,所以近来的研究集中于开发一种全新的药物,使其要么具有更高的选择性,要么具有两个或全部PPAR活化特性。PPARα/PPARγ激动剂tesaglitazar就被认为可改善脂肪餐后的糖脂代谢[9]。

TZD类药物罗格列酮是目前治疗胰岛素抵抗的代表药物,它促进PPARγ表达增加和脂肪细胞的分化,促进葡萄糖转运,增加脂肪组织胰岛素敏感性,但却有肥胖等脂质积聚的副作用[6]。我们的实验结果表明蒲黄总黄酮可提高PPARα和PPARγ mRNA的表达,说明它能在一定程度上改善胰岛素抵抗引起的糖脂代谢紊乱。而且蒲黄总黄酮促进脂肪细胞的分化,促进PPARγ mRNA表达的效应与PPARγ激动剂罗格列酮相似,但PPARγ mRNA的上升幅度却小于罗格列酮,说明其在脂肪细胞的积聚这一副作用可能小于罗格列酮。这对临床选择治疗胰岛素抵抗中药有一定的指导作用。

但蒲黄总黄酮改善胰岛素敏感性的确切机制及能量的去处尚有待于深入研究。而且,在体内的作用与离体的作用并不完全相同,会受到其他因素的影响,因此进一步研究蒲黄总黄酮改善胰岛素抵抗的机制,探究其在体内的作用及影响因素是一项颇具意义的工作。

参考文献

1 Wilding JP. The importance of free fatty acids in the development of Type 2 diabetes. Diabet Med. 2007; 24(9): 934945.

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王海波, 王章元. 蒲黄药理作用的研究进展. 医药导报. 2005; 24(4): 318319.

3 He YM, Wang WJ, Chen WH, et al. Effects of Pollen Typhae total flavone on glucose and lipid metabolism in 3T3L1 adipocytes. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2006; 4(6): 593595. Chinese with abstract in English.

何燕铭, 王文健, 陈伟华, 等. 蒲黄总黄酮对3T3L1脂肪细胞糖脂代谢的影响. 中西医结合学报. 2006; 4(6): 593595.

4 Takano A, Haruta T, Iwata M, et al. Growth hormone induces cellular insulin resistance by uncoupling 3kinase and its downstream signals in 3T3L1 adipocytes. Diabetes. 2001; 50(8): 18911900.

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6 Chou FS, Wang PS, Kulp S. Effects of thiazolidinediones on differentiation, proliferation, and apoptosis. Mol Cancer Res. 2007; 5(6): 523530.

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通报表扬单位的范文 第2篇

各部(室)、物管中心、各管理处:

mm花园保安员jj7月15日中午在车库值班时,看到5幢402房业主急匆匆走过,便主动上前询问,业主反映有可疑人员在行骗,jj听后马上跑到楼梯口,刚好碰到可疑人员,经过一番搏斗终于制服可疑人员,该人见硬的不成,便跪下哀求放他一马,jj不为所动,把他扭送到管理处.管理处主任了解情况后立即向派出所报案,该人一听要报警,企图夺路逃跑,被jj及管理人员制止,该人又用头撞向墙壁和玻璃窗,再次被jj制服.后经派出所查明,该可疑人员是一个到处诈骗的犯罪分子.事后许多业主都 说:_住在有这样责任心保安员的小区里,我们放心._

为了表彰jj机智勇敢维护小区治安的先进行为,经公司研究决,奖励jj同志200元以资鼓励,并在全公司通报表彰.

公司要求全体保安人员提高警惕,加强对进入小区可疑人员的盘查跟踪,确保小区安全.

X年XX月XX日

通报表扬单位的范文 第3篇

目的 研究缺氧诱导因子1α(hypoxiainducible factor1α,HIF1α)在缺氧的胃癌细胞SGC7901的表达及其同缺氧时Fas、PCNA关系, 探讨HIF1α同缺氧时胃癌细胞增殖凋亡的关系。方法 产气袋法(GasPaK)制造缺氧细胞培养条件,细胞免疫化学观察SGC7901细胞HIF1α、PCNA及Fas的变化。结果 缺氧时SGC7901细胞HIF1α表达明显上调,HIF1α表达随缺氧时间延长而增加。缺氧时HIF1α表达与Fas呈负相关(P

【关键词】 缺氧诱导因子1α 胃癌细胞SGC7901 细胞凋亡;增殖

Expression of HIF1α and Its Relationship to Apoptosis and Proliferation in Gastric Cancer Cell During Hypoxia

Key words:Hypoxiainducible factor1α; Gastric cancer cell SGC7901; Apoptosis; Proliferation

资料显示,实质性肿瘤发生过程中,由于血管生长的相对滞后和肿瘤细胞的快速增殖导致肿瘤细胞缺氧[13]。缺氧是实质性肿瘤微环境的基本特征之一。缺氧诱导因子(hypoxiainducible factor,HIF1)是在缺氧条件下广泛存在于人和哺乳动物体内的一种转录因子。由HIF1α 和HIF1β亚单位组成,HIF1α是HIF1特有的受缺氧调控的亚基,决定HIF1的活性。HIF1α是迄今为止发现的唯一一个特异性缺氧状态下发挥活性的转录因子。近年来,随着对HIF1α研究的进一步深入,发现它广泛存在于动物和人类的多种肿瘤细胞中,其活性对维持肿瘤细胞能量代谢、新生血管形成、促进肿瘤侵袭和转移起重要作用。探讨HIF1α同缺氧条件下肿瘤细胞凋亡、增殖的关系,了解其在肿瘤细胞凋亡、增殖的作用。对于研究HIF1α在肿瘤发生、发展中的作用及探索以HIF1α为靶点的抗肿瘤治疗有重要意义。本研究通过对人胃癌细胞SGC7901中HIF1α的表达及其同缺氧时Fas、PCNA表达的检测,探讨HIF1α在胃癌发生、发展中可能的作用。

1 材料及方法

材料

人胃癌细胞株SGC7901,重庆医科大学病理生理教研室提供。兔抗人Fas多克隆抗体(工作浓度1∶200),SP免疫组化试剂盒,购于北京中山生物技术有限公司。鼠抗人PCNA多抗(工作浓度1∶400)购于武汉博士德生物工程公司。鼠抗HIF1α单抗(工作浓度1∶25),购于晶美生物工程公司。

方法

微缺氧条件的制造

运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件。通过血气分析仪监测含小牛血清的RPMI1640培养液中PO2、PCO2和pH的变化,本装置在48h内PO2、PCO2和pH稳定,并能达到微缺氧细胞培养的条件(1%~5%氧、5%CO2及90%氮)。

不同氧状态下细胞爬片的制备

取对数生长期的SGC7901细胞,用含10%小牛血清RPMI1640培养液,配成浓度为5×104 /ml的细胞悬液。并分为对照组、缺氧4h组、缺氧8h组、缺氧16h组。各取细胞悬液2ml/孔分别接种于装有盖玻片的6孔培养板内。对照组入CO2培养箱(20%氧、5%CO2、75%氮、37℃)中培养72h,缺氧4h组、缺氧8h组、缺氧16h组。分别入CO2培养箱培养68、64、56h后,再入微缺氧装置内继续培养4、8、16h。

SP免疫组化法检测HIF1α、Fas、PCNA

取出6孔板内已爬满细胞的盖玻片,PBS洗涤,4%多聚甲醛固定, 甲醇作用30min, 正常羊血清阻断30min, 分别给缺氧组和对照组依次加入稀释的一抗HIF1α、Fas、PCNA,4℃孵育过夜,生物素化二抗和辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素依次处理(37℃,孵育30min), 期间均用PBS洗涤, AEC显色, 水溶性封片剂封片。每次染色时均以PBS代替一抗作为阴性对照。

判断标准

排除爬片边沿细胞,10×10低倍镜下随机选取10个细胞分布均匀的视野,10×20中倍镜下随机计数50个细胞/每视野。按着色强弱分4个等级,按公式HSCORE=∑Pi(i+1)(i=0、1、2、3;Pi表示评分为i的比例) 计算HSCORE得分。

统计学处理

所有数据均用±s表示,采用F检验及q检验分析,数据均用统计软件包分析。用Spearman等级相关分析HIF1α同SGC7901细胞PCNA、Fas的相互关系。

2 结果

不同氧状态下人胃癌细胞株SGC7901 HIF1α、Fas 、PCNA的表达

常规培养条件下SGC7901细胞仅个别细胞有HIF1α阳性表达,低氧处理4h后HIF1α出现阳性表达,并随低氧处理时间的延长逐渐增加(rs=),见图1。常规培养条件下Fas、PCNA均在SGC7901细胞有阳性表达,低氧处理4h后Fas表达增加,但随低氧处理时间的延长,Fas表达所有下降(rs=),见图2、3。PCNA在不同氧状态下的表达无明显差异,见表1。表1 不同氧状态下HIF1α、Fas 和PCNA在SGC7901细胞的表达常规培养条件下由于HIF1α在SGC7901细胞低表达,无法判断其同Fas及PCNA的关系。缺氧条件下SGC7901细胞HIF1α表达同Fas表达呈负相关(rs=,)。

3 讨论

HIF1α在不同氧状态下人胃癌细胞株SGC7901的表达

Zhong 等[7]对包括胃癌、胰腺癌等癌组织标本及人体正常组织分析发现,大多数人体正常组织中没有或仅有弱阳性的HIF1表达,而癌组织中HIF1呈过度表达。体外实验也证实HIF1α在多种肿瘤细胞株缺氧时呈阳性表达[8,9],本研究发现SGC7901细胞在常氧下仅个别细胞HIF1α呈阳性表达,阳性表达部位在胞核, 阳性率仅在1%~3%。可以认为在常氧下SGC7901细胞不表达HIF1α,在低氧处理后,HIF1α表达明显上调。可能同缺氧阻止了HIF1α的降解,使在非缺氧时易降解的HIF1α蛋白稳定性增加。HIF1α蛋白水平呈指数增加有关[10,11]。本研究还发现HIF1α表达随缺氧时间的延长逐渐增加,是否同SGC7901细胞逐渐适应缺氧有关,尚待进一步研究。

缺氧状态下SGC7901细胞HIF1α的表达同细胞凋亡的关系

缺氧能诱导肿瘤细胞凋亡,己在实验研究中得到证实[9]。但缺氧时HIF1α的表达同细胞凋亡的关系尚存有争议。Akakura等[10]在胰腺癌的研究中发现HIF1α高表达的胰腺癌细胞比无HIF1α表达的更能抵抗缺氧和无糖所诱导的凋亡。HIF1α高表达可以明显地增加bcl2的表达[11],而在樊利芳等[12]研究中显示,HIF1α表达同bcl2的表达呈负相关,表明HIF1α促进缺氧环境下肿瘤细胞凋亡。本实验中我们发现,在缺氧环境下SGC7901细胞HIF1α表达明显上调,同参与细胞凋亡诱导的Fas基因的表达呈负相关,从而使SGC7901细胞能抵抗缺氧所诱导的凋亡。可能同受HIF1所调控,参与能量代谢和运输基因及蛋白以不同方式参与肿瘤细胞对缺氧的适应过程有关。

缺氧状态下SGC7901细胞HIF1α的表达同细胞增殖的关系

PCNA是DNA聚合酶的辅助因子,参与DNA的合成。已广泛使用于评定肿瘤细胞增殖活性。HIF1α同肿瘤细胞增殖的关系一直存有争议。Carmeliet等[5]研究表明HIF1α的缺陷阻止了细胞在缺氧条件下的生长,但在细胞分裂时可刺激其增殖。Horiuchi等[13]发现缺氧时卵巢癌细胞株的细胞数目不减少,同HIF1α表达增加从而增加了p27的表达和降低cyclinD1及cyclinRB表达有关。Zhong等[14]发现在前列腺癌组织及乳腺癌组织中,HIF1α表达与Ki67指数相关。Volm等[15]研究小细胞肺癌时HIF1α与cyclinA表达和细胞周期的关系,发现HIF1α与细胞增殖无关,存在不同的结果可能同研究的肿瘤组织及检测指标不同有关。本实验表明,在缺氧条件下SGC7901细胞HIF1α表达同PCNA无关。

本实验通过对缺氧条件下SGC7901细胞HIF1α、Fas及PCNA表达的观察,分析了HIF1α表达同细胞凋亡及增殖的相关性,结果表明HIF1α抑制缺氧所诱导的胃癌细胞凋亡而与细胞增殖无关。认识HIF1α在胃癌发生、发展中的作用,将为胃癌治疗提供新靶点及思路。

【参考文献】

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[13]Horiuchi A, Imai T, Shimizu M, et al. Hypoxiainduced changes in the expression of VEGF, HIF1 alpha and cell cyclerelated molecules in ovarian cancer cells[J]. Anticancer Res, 2002,22(5):26972702.

通报表扬单位的范文 第4篇

火灾无情人有情,大灾面前有大爱。

20xx年7月9日凌晨1点,位于大桥镇新井街52号住户赵春林家中发生火灾。当时,两层楼房着火,并伴有浓烟,卷帘门瞬间被大火吞噬。在这一紧急时刻,大桥镇敬阳松、敬保朝等九名群众及时赶到。他们克服黑暗,与镇派出所同志紧密配合,找来高压水泵,迅速引来水源,投入紧张的灭火工作中。由于压强较大,高压水泵靠人个力量无法稳固,几名男同志就组成力量把高压水泵环抱起来对准大火。然而当天风势较大,大火迅速蹿到屋后并大幅蔓延,灭火的同志赶忙分工协作,一部分人留在屋前灭火,一部分人跑到屋后面去灭火,还有的人负责维持现场秩序,避免围观群众靠近火区。最终,大家通过在房前屋后进行夹攻才将大火扑灭。

“火灾”火势凶猛,当天风雨交加,各种消防器材不足、还要克服黑暗,在这样一种严峻的形势下最终顺利将大火扑灭。在社会意识较为淡薄的今天,依然有大桥镇敬阳松、敬保朝、张青松、胡闯、范二娃、鲜永红、张纤、马军华、马俊等九名同志不畏艰险、不怕危险冲向大火。为了弘扬这种崇高的道德风尚,大桥镇党委决定授予该九名同志“见义勇为居民”称号。

镇党委号召:危险并不可怕,可怕的是在危险面前有人退缩。我们应自觉践行“全民关注消防、生命安全至上”这一主题,向这九名同志学习,在灾难面前不退却,一起努力克服困难,共同参与和支持消防安全行动,形成人人关心消防,在危险面前全民一条心。我们要自觉地树立起高度的社会责任感,为共同营建大桥镇的美好明天,为构建社会主义的和谐未来而奋斗!

大桥镇党委

20xx年7月24日

通报表扬单位的范文 第5篇

【摘要】

目的: 探讨红景天苷激活HIF-1α表达, 抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡的可能的信号通路。方法: 将原代培养的心肌细胞分为4组: 正常对照组、 缺氧组、 缺氧+100 mg/L红景天苷组、 缺氧+100 mg/L红景天苷+LY294002组。MTT法测定细胞存活率, Hoechst33258染色、 DNA-ladder检测细胞凋亡, 通过免疫荧光染色、 Western blot检测细胞Akt、 磷酸化Akt、 HIF-1α的表达。结果: LY294002处理后, 红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的保护作用被明显减弱, 细胞存活率明显下降(P

【关键词】 红景天苷 心肌细胞 PI(3)K/Akt HIF-1α

大量实验证实, 缺氧可诱导心肌细胞凋亡, 造成心肌损伤,进而参与心力衰竭的发病过程[1]。红景天苷(salidroside, Sal)为传统中药红景天的有效萃取物之一。近年研究表明,红景天苷具有抗缺氧、 抗疲劳、 抗辐射、 抗衰老和抑制人脐静脉内皮细胞[2]等多种药理作用。通过前期实验, 我们已经证实红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡具有良好的抑制作用, 且这种抑制作用具有剂量依赖性, 并首次证实其分子机制可能与激活缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor-1α, HIF-1α)的表达, 诱导其转位有关。但其具体的信号通路, 至今仍不明确。本研究拟通过研究Akt变化, 进一步探讨红景天苷激活HIF-1α表达可能的信号通路。

1 材料和方法

材料 红景天苷(纯度>99%)购自中国药品生物制品鉴定所。新生牛血清、 DMEM低糖培养基购自Gibco公司。胶原酶I、 噻唑蓝(MTT)、 5-溴-2′-脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)、 LY294002、 RNase A均购自Sigma公司。Hoechst 33258染料、 BCA蛋白定量试剂盒购自碧云天生物技术研究所。蛋白酶K购自Merck。HIF-1α兔多克隆抗体购自美国Novus。Akt、 磷酸化Akt抗体均购自CST。HRP、 FITC标记羊抗兔二抗均购自北京中山。其余试剂为国产分析纯级。

方法

心肌细胞原代培养 取新生1~3 d SD大鼠(第四军医大学实验动物中心提供)心室肌组织并剪碎, 用 g/L的胶原酶I37℃分次消化, 分离心肌细胞。以含100 mL/L新生牛血清的DMEM低糖培养基制备细胞悬液, 差速贴壁后加入100 μmol/L BrdU纯化心肌细胞, 使纯度达到90%以上, 接种细胞至培养板。

缺氧模型建立 采用Koyama等[3]方法配制缺氧液(mmol/L): 、 、 、 MgSO4 、 乳酸钠 40、 HEPES 20、 NaCl 、 KCl , , 37℃, 以高浓度氮气饱和(> 1 L/min×30 min), 测其血气PO2≤ kPa。用缺氧液置换正常培养液, 三气培养箱(Kendro, Germany), 调整气体浓度为950 mL/L N2+50 mL/L CO2, 孵育6 h。

实验分组 将培养的心肌细胞分为4组: (1)正常对照组(Control): 用正常培养液培养细胞; (2)缺氧组(Hypoxia): 参照上述方法, 建立缺氧模型; (3)100 mg/L红景天苷预处理组(Hypoxia+Sal): 缺氧前, 100 mg/L红景天苷预处理24 h, 参照(2)行缺氧处理。(4)LY294002+红景天处理组 (Hypoxia+Sal+LY): 100 mg/L红景天苷预处理24 h后继续用20 μmol/L LY294002处理1 h, 参照(2)行缺氧处理。

观察指标

细胞存活率 MTT比色法检测细胞存活率。细胞接种于96孔板, 缺氧处理后, 每孔加入5 g/L MTT 20 μL, CO2孵箱孵育4 h, 弃上清液, 每孔加入DMSO 150 μL, 震荡10 min, 酶联免疫检测仪上490 nm波长测定各孔光吸收度。

Hoechst 33258染色 各组细胞处理后, 40 g/L多聚甲醛固定, PBS冲洗2次, 5 g/L Hoechst 33258染料孵育10 min, PBS冲洗2次后紫外线激发, 荧光倒置显微镜下任选5个视野观察计数并拍照。

DNA琼脂糖凝胶电泳 参照文献[4]方法提取心肌细胞DNA。配制20 g/L琼脂糖凝胶, 加入8 μg DNA样品, TBE缓冲液中电泳, 凝胶成像系统中成像。

HIF-1α免疫荧光染色 培养细胞于12孔板, 处理细胞后40 g/L多聚甲醛固定并透化处理, PBS充分清洗后, 100 g/L羊血清封闭, 加入HIF-1α兔多克隆抗体(1∶400) 4℃过夜孵育。PBS充分清洗, 羊抗兔FITC标记的荧光二抗孵育30 min, 荧光显微镜下观察细胞并拍照。

Western blot检测 培养细胞于6孔板, 缺氧处理后, 参照文献[5]裂解细胞BCA试剂盒蛋白定量后, SDS-PAGE系统电泳转膜后加入一抗, 包括HIF-1α抗体(1∶1000)、 Akt抗体(1∶1000)、 p-Akt抗体(1∶1000)、 β-actin抗体(1∶2000), 二抗为HRP标记羊抗兔抗体(1∶1000 )。

统计学处理 实验数据以x±s表示, 用Graphpad Software统计软件进行组与组之间单因素方差分析。

2 结果

LY294002使细胞存活率下降 MTT实验结果表明, 缺氧后心肌细胞存活率为(±)%, 较正常组细胞明显下降, 有统计学意义(P

图1 MTT比色法测定细胞存活率(略)

1: 正常组; 2: 缺氧组; 3: 缺氧+Sal组; 4: 缺氧+Sal+LY组. bP

LY294002使细胞凋亡增多 细胞发生凋亡时, 染色质会固缩, Hoechst33258染色显示细胞核呈致密浓染, 或呈碎块状致密浓染(如图 2B、 C、 D箭头所示)。每组细胞任选5个视野进行细胞计数, 计算染色阳性细胞比率, 进行统计学分析。统计结果(图2E)显示, 缺氧组细胞Hoechst染色阳性细胞率与正常组细胞比较有明显差异(P

LY294002阻断Akt的磷酸化 大量资料证实, LY294002为PI(3)K特异性_, 它可以阻断PI(3)K的下游靶蛋白Akt的磷酸化表达。结果如图4所示, Sal与LY294002均未改变细胞Akt总蛋白水平, 与正常组细胞比较, 缺氧后细胞磷酸化Akt水平明显升高, Sal预处理后其磷酸化水平进一步提高, 而LY294002处理后, Sal的这种提高Akt磷酸化的作用被阻断, 磷酸化Akt蛋白表达水平明显下降。

图2 Hoechst 33258染色检测细胞凋亡率(×200)(略)

A: 正常组; B: 缺氧组; C: 缺氧+红景天苷组; D: 缺氧+红景天苷+LY; E: Hoechst染色阳性细胞比率. 1: 正常组; 2: 缺氧组; 3: 缺氧+Sal组; 4: 缺氧+Sal+LY组. bP

图3 DNA ladder检测细胞凋亡(略)

M: DNA marker; 1: 正常组; 2: 缺氧组; 3: 缺氧+红景天苷组; 4: 缺氧+红景天苷+LY组.

图4 Western blot检测心肌细胞p-Akt及Akt蛋白表达(略)

1: 正常组; 2: 缺氧组; 3: 缺氧+Sal组; 4: 缺氧+Sal+LY组. aP

LY294002阻断HIF-1α的表达 近来研究证实, PI(3)K的_可抑制HIF-1α的稳定及表达[6]。免疫荧光及Western blot试验结果均与之一致(图5、 6)常培养的细胞HIF-1α迅速降解, 故较少有蛋白表达; 缺氧后, 细胞HIF-1α表达稳定, 免疫荧光及Western blot结果均显示HIF-1α蛋白表达量明显增加; Sal可进一步激活HIF-1α的表达, 而PI(3)K特异性_LY294002抑制了HIF-1α的表达, 蛋白表达水平较Sal预处理组明显减少(P

图5 免疫荧光染色检测心肌细胞HIF-1α蛋白的表达(×200)(略)

A: 正常组; B: 缺氧组; C: 缺氧+Sal组; D: 缺氧+Sal+LY组.

图6 Western blot检测心肌细胞HIF-1α蛋白表达(略)

1: 正常组; 2: 缺氧组; 3: 缺氧+Sal组; 4: 缺氧+Sal+LY组. bP

3 讨论

近年, 大量的实验模型及其人类心脏疾病证实, 凋亡造成的心肌细胞的减少在人类多种类型的心脏疾病中占极其关键地位, 并最终导致心脏功能的衰竭。因此, 阻断细胞凋亡进程可以延缓甚至阻断心衰的发生。本研究中, 通过检测细胞存活率、 细胞凋亡比率及其相关蛋白表达水平, 证明了心肌细胞经PI(3)K特异性阻断剂LY294002处理后, 红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的保护作用被明显减弱,细胞存活率明显下降, 细胞凋亡比率明显增加, 琼脂糖凝胶电泳结果显示特异性“ladder”灰度明显加深, 磷酸化Akt、 HIF-1α2种蛋白表达水平明显降低, 这些结果均提示, 在红景天苷抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡过程中, Akt起到了重要的作用, 通过它的磷酸化诱导了HIF-1α的表达。

PI(3)K/Akt信号通路可激活一系列生长信号通路, 阻断一系列凋亡信号通路, 从而促进细胞的存活、 增殖。相反, 阻断PI(3)K/Akt信号通路, 可导致细胞的凋亡。研究证实, 缺氧或胰岛素等生长因子可激活Akt的磷酸化, 进而诱导HIF-1α蛋白的稳定及其转录, 增加其表达[7]。但其具体的机制至今仍不明确。Sodhi等[8]研究证实, HIF-1并不含有Akt磷酸化后的结合位点, Akt磷酸化并不能直接诱导HIF-1α的表达, 但Akt激活后, 可激活其下游靶蛋白GSK-3(glycogen synthase kinase-3, 糖原合成激酶3)磷酸化的增加, 从而抑制HIF-1α的降解, 增加其表达。也有研究证实, Akt可能通过激活mTOR(mammalian target of rapamycin, 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)的表达, 从而促进HIF-1α的转录[9]。通过本实验, 我们发现PI(3)K_LY294002可明显减少HIF-1α表达, 红景天苷处理后细胞凋亡率明显升高, 这些结果显示, 红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用可能是通过激活Akt的磷酸化进而诱导了HIF-1α的稳定表达途径而实现的。

综上所述, 红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用可能与激活PI(3)K/Akt的磷酸化进而诱导HIF-1α的表达有关。本研究将为红景天苷开发用于缺氧造成的心脏疾病的治疗制剂提供了一定的理论基础。

参考文献

[1] Mehrhof FB, Müller FU, Bergmann MW, et al. In cardiomyocyte hypoxia, insulin-like growth factor-induced antiapoptotic signaling requires -3-OH -kinase-dependent and mitogen-activated protein kinase-dependent activation of the transcription factor cAMP response element-binding protein[J]. Circulation, 2001, 104(17): 2088-2094.

[2] 隋岫兰, 杨 峰, 陈荣华, 等. 红景天抑制人脐静脉内皮细胞生长的初步研究[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2006, 22(4): 524-525.

[3] Koyama T, Temma K, Akera T, et al. Reperfusion induced contracture develops with a decreasing Ca2+: in single heart cells[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 1991, 261(15): 1115-1122.

[4] Xu MF, Uemura R, Dai Y, et al. In vitro and in vivo effects of bone marrow stem cells on cardiac structure and function[J]. J Mol Cell Cardiol, 2007, 42(2): 441-448.

[5] Von HR, Li PF, Dietz R. Signaling pathways in reactive oxygen species-induced cardiomyocyte apoptosis[J]. Circulation, 1999, 99(22): 2934-2941.

[6] Wayne Z, Comelia S, Daphne HK, et al. Loss of PTEN facilitates HIF-1-mediated gene expression[J]. Gene & Dev, 2000, 14(4): 391-396.

[7] Johnson DB, Rust RT, Hsieh TC, et al. Hypoxia activates Akt and induces phosphorylation of GSK-3 in PC12 cells[J]. Cell Signal, 2001, 13(1): 23-27.

通报表扬单位的范文 第6篇

表曝型氧化沟工艺是污水处理的传统工艺,其工艺特点结构简单、运行可靠、出水水质优良而被城市污水处理广泛的采用。表曝型氧化沟自动化控制系统通过对设置在氧化沟中污水检测仪表的数据采集例如:MLSS、DO,结合氧化沟总进水量、进水水质,通过运算、比较、分析 选择合理的曝气曲线指导表曝机有规律的运行,使得氧化沟中各段溶解氧的含量在合理的范围内,不产生曝气不足和饱和曝气现象。由于污水中溶解氧的消耗和污泥浓度MLSS等因素有关具有滞后性、延缓特征,因此采取恒定曝气和间歇性曝气是针对溶解氧在污水中的传递达到平衡的理想解决办法,实践证明自动化曝气不仅提高了氧化沟整体经济运行效率,而且使得出水水质更好。

关键词:表曝型氧化沟自动化节能系统、曝气曲线、经济运营、自动调节、恒定曝气和间歇性曝气

Abstract:

Table type aerating oxidation ditch process of sewage treatment is the traditional process, the process features of simple structure, reliable operation, good water quality and water by the urban sewage treatment widely adopted. Table type aeration oxidation ditch automation control system through to set in the oxidation ditch in sewage measurement instrument of data collection for example: MLSS, DO, combined with the oxidation ditch into water, total feed water quality, through the operation, the comparison and analysis of the reasonable selection of aeration curve guidance table aeration machine regular operation, make the oxidation ditch the dissolved oxygen content in paragraphs in the reasonable scope, DO not produce the aeration shortage and saturated aeration phenomenon. Due to the consumption of dissolved oxygen in sewage sludge concentration and other factors, such as the MLSS with hysteresis and delay characteristics, so adopt constant aeration and intermittent aeration is dissolved oxygen in the transmission in sewage balance of the ideal solution, the practice has proved automation aeration not only increase the oxidation ditch overall economic efficiency, but also make better effluent water.

Key Words: Table type aeration oxidation ditch automation control systems, aeration curve, economic operation, automatic regulation, Constant aeration and intermittent aeration

中图分类号:TE08文献标识码:A 文章编号:

一、城市污水厂自动化运行现状

我国城镇污水处理厂自动化控制技术起步较晚,20世纪90年代以后,污水处理厂才开始引入自动控制系统,但多是直接引进国外成套自控设备,国产自动控制系统在污水处理厂应用很少,由于污水处理涉及的技术较专业,且行业跨度较大使得专门从事污水自动化技术研究的专业技术人员相对匮乏;主要体现在污水综合自动化技术发展较为落后和应用水平方面。以智能决策为目标的信息化技术则相对迟缓,“信息孤岛”现象依然严重,自动化技术和信息化技术缺乏融合,大量的过程数据都静静地“躺”在现场,而没有发挥其应有的作用。

二、污水处理氧化沟工艺的特点

氧化沟工艺是集有机物降解、脱氮、除磷三功能于一体的生物处理技术,因此该工艺运行控制要同时满足三个功技术要求。针对污水厂的进水水质特点及进水量、出水水质要求的基础上得出具体的优化控制方式。

通报表扬单位的范文 第7篇

公司各部门、各分公司:

分公司经理同志自进入公司以来工作勤奋努力,他所带领的团队富有强烈的开拓意识和协作精神,已在市场取得了可喜的成绩,为中交科技的员工树立了良好的榜样。

经公司领导研究决定,现对分公司区域经理予以通报表扬并奖励该员工人民币1000元整以资鼓励。

希该员工再接再厉,同时望全体员工积极向他学习,共创科技辉煌。

特此通报。

人事行政中心

年月日

通报表扬单位的范文 第8篇

表扬奖励通报范文一

公司各部门、各分公司:

XX分公司经理XX同志自进入公司以来工作勤奋努力,他所带领的团队富有强烈的开拓意识和协作精神,已在XX市场取得了可喜的成绩,为中交科技的员工树立了良好的榜样。

经公司领导研究决定,现对XX分公司区域经理XX予以通报表扬并奖励该员工人民币1000元整以资鼓励。

希该员工再接再厉,同时望全体员工积极向他学习,共创XX科技辉煌。

特此通报

人事行政中心

二XX年九月四日

表扬奖励通报范文二

各位员工:

本年度在各位员工的共同努力下,研发工作有了很大的突破。为了再创佳绩,经公司研究,决定对本次研发新产品表现突出的优秀员工予以通报奖励,表彰他们发扬主人翁的精神,以企业发展为前提,以提高经济效益为目标,在各自的岗位上勤奋工作、积极进取的精神。希望收到表彰的员工在今后的工作中再接再厉,取得更好的成绩。

xx集团有限公司

xx年x月x日

表扬奖励通报范文三

各街道办事处,区人民政府各工作部门,各直属机构:

xxxx年,全区上下牢固树立安全发展理念,始终坚持“安全第一、预防为主、综合治理”的安全生产工作方针,以开展“隐患治理年”活动为契机,深入开展安全生产“百日督查”专项行动,强化组织领导,构建长效机制,落实安全责任,加大安全投入,有效地减少了事故的发生,保持了安全生产形势的持续稳定,涌现出了一大批先进单位和先进个人。

为发挥先进单位和先进个人的模范带头作用,进一步调动全区上下抓好安全生产工作的积极性,经区政府研究,决定对大明宫街道办事处等19家安全生产目标管理先进单位、三桥街道办事处和六村堡街道办事处2个安全生产工作创新单位、xxx等35名安全生产先进个人予以表彰。

希望受表彰的先进单位和先进个人珍惜荣誉,发扬成绩,再接再厉,为我区安全生产工作继续做出新的贡献。全区各单位、各企业要以受表彰的先进单位和先进个人为榜样,锐意进取,扎实工作,巩固和扩大安全生产成果,为维护全区社会稳定和促进经济发展作出更大贡献。

年月日

通报表扬单位的范文 第9篇

刚刚过去的年是公司技改项目投产后,激烈市场竞争的一年,严峻挑战和考验的一年。一年来,面对原煤涨价、焦炭价格持续下跌、拉闸限电、运力、银根紧缩等不利因素,全体干部职工团结,群策群力,艰苦奋斗,同心开拓,涌现出了一大批管理科学、敢于创新、成绩的先进集体和兢兢业业、勤勤恳恳、尽职尽责、勇于奉献的先进分子。鼓励先进,典型,激发干部职工在逆境中奋勇向前的热情,全公司整体工作再上新台阶,经公司决定,对年度涌现出的先进集体和先进个人予以表彰奖励:

一、先进集体3个(排名不分先后):

、处奖励奖牌一块,奖金元。

二、优秀班集体6个(排名不分先后):

、班奖励奖牌一块,奖金元。

三、劳动模范3名(排名不分先后):

、,奖励奖金元。

公司希望受表彰的先进集体和先进个人要谦虚谨慎,戒骄戒躁,再接再厉,再创佳绩。公司号召全体干部、职工要虚心学习的经验,胸怀全局,,勇于革新,工作,埋头苦干,不计得失,勤于动脑,敢于,以严谨的科学、的工作作风和敢为人先的创新意识,为公司早日装备现代化、经营国际化、管理科学化、产品精尖化的战略而努力奋斗!

年月日

通报表扬单位的范文 第10篇

各分公司、片区、部门:

月日凌晨3:15分左右,秩序班长巡逻到4幢1单元12楼时,发现一个黑色电脑包,他立刻通知队友到达现场,一起在监控头前进行查看,包内有手提电脑一台、内存卡及重要资料等。由于是凌晨不便寻找失主,便通知主管,将电脑暂放门岗保管。次日一早,两人便将电脑包交到服务中心,并贴出了失物招领提示。上午九点多钟,小区2栋1单元1601业主来到服务中心认领电脑,称昨晚由于饮酒过多不知电脑遗失在什么地方。经调看监控查看,该业主确于凌晨2:47分乘坐了4栋1单元电梯,同时该业主准确地说出了包内物品,核实无误后将物品交还失主。业主对此非常感谢,随后又特意写了一封感谢信送到服务中心。

此事件中,秩序维护员们表现出了高度的工作责任心和良好的职业素养,为公司赢得了声誉。经董事会研究决定:对给予通报表扬,奖励现金100元,并号召全体员工向他学习!

物业管理有限公司

行政管理部

签发人:

年月日

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文章名称:《通报表扬单位的范文(实用10篇)》
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